本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的皮質(zhì)酮（CORT）濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于下丘腦 - 垂體 - 腎上腺軸、應(yīng)激反應(yīng)、糖脂代謝、免疫抑制及腎上腺功能研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)elisa試劑盒 | 英文名稱 | CORT ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5592E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 CORT 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，CORT 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗大鼠 CORT 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本處理
1) 血清：無菌無熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。
2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。
3) 細(xì)胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。
4) 組織勻漿：預(yù)冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。
2. 通用注意
嚴(yán)禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標(biāo)樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實(shí)驗(yàn)建議設(shè)置復(fù)孔。
操作步驟：
1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。
2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣后封板。
3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng)，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。
4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復(fù)洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。
5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。
6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體，保證背景干凈。
7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。
8.加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。
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