產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用速率法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、腸道組織勻漿中的 α 葡萄糖苷酶（α-Glu）活性。檢測范圍覆蓋 0.313-20 U/L，靈敏度達(dá) 0.16 U/L，適用于糖代謝調(diào)控、糖尿病研究、腸道消化功能及酶抑制劑篩選研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa試劑盒
英文名稱：a-Glu ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-6133E
檢測原理：
大鼠 α 葡萄糖苷酶 (a-Glu) ELISA 試劑盒的原理是速率法，通過 α-Glu 催化糖類底物的水解反應(yīng)，生成的還原糖與顯色劑反應(yīng)，利用吸光度變化速率定量檢測酶活性。
固相化：微孔板預(yù)先包被 α-Glu 特異性底物。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，α-Glu 催化底物水解生成還原糖。
檢測：加入還原糖顯色劑，與產(chǎn)物發(fā)生特異性顯色反應(yīng)。
顯色：顯色劑隨還原糖生成量逐漸變色，顏色深淺與 α-Glu 活性相關(guān)。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長連續(xù)測定吸光度變化速率，活性與速率值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?：
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），按說明書稀釋洗滌緩沖液（通常1:19）。
?標(biāo)準(zhǔn)品?：用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?：血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高，可按說明書（如1:10）稀釋。
?2、加樣與孵育?：
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻，避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘（部分試劑盒可能為120分鐘，需以說明書為準(zhǔn)）。
?3、洗滌?：
棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液加滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)5-6次。
4?、加檢測抗體與孵育?：
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?：
同步驟3，洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測定?：
每孔加入50μL終止液，立即混勻（顏色由藍(lán)變黃）。
在加終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔吸光度（OD值）。
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