本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 B（VEGF-B）濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于內(nèi)皮細(xì)胞存活、血管穩(wěn)態(tài)、心肌保護(hù)及脂質(zhì)代謝相關(guān)血管研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子Belisa試劑盒 | 英文名稱 | VEGF-B ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5361E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 VEGF-B 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，VEGF-B 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗大鼠 VEGF-B 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
血清：無(wú)熱源無(wú)菌采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。
2. 通用注意事項(xiàng)
1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉（NaN?），會(huì)抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。
2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。
3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。
4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實(shí)驗(yàn)誤差。
5) 檢測(cè)濃度超標(biāo)時(shí)，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質(zhì)體系。
操作步驟：
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽(yáng)性。
TMB 顯色液避光儲(chǔ)存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴(yán)禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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