本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的 ALP-B 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于成骨細胞活性、骨形成速率、骨代謝及骨質(zhì)疏松模型研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠骨特異性堿性磷酸酶Belisa試劑盒 | 英文名稱 | ALP-B ELISA Kit |
貨號 | CS-5865E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 ALP-B 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，ALP-B 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 ALP-B 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。
2. 實驗流程
加樣：設(shè)置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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