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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、細胞及組織勻漿中的 HMGB-1 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于晚期炎癥介質(zhì)、細胞壞死、膿毒癥及自身免疫炎癥研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 HMGB-1 抗體。

結(jié)合：加入標準品或樣本，HMGB-1 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 HMGB-1 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細胞上清：離心除雜質(zhì)，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復(fù)孔檢測。

操作步驟：

1. 試劑準備

將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。

標準品用標準品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。

2. 實驗流程

加樣：設(shè)置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。

洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。

加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。

洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。

顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。

讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。

3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點

全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。

洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。

TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴禁接觸氧化劑。

加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。

公司正在出售的產(chǎn)品：