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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的銅藍(lán)蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)、鐵氧化代謝、抗氧化防御及肝豆?fàn)詈俗冃韵嚓P(guān)研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 CP 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，CP 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 CP 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

血清：無熱源無菌采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。

2. 通用注意事項(xiàng)

1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉（NaN?），會(huì)抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。

2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。

4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實(shí)驗(yàn)誤差。

5) 檢測(cè)濃度超標(biāo)時(shí)，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質(zhì)體系。

操作步驟：

1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。

2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。

3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。

4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。

5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。

7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。

8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃；立即用酶標(biāo)儀在對(duì)應(yīng)波長測(cè)定 OD 值。

9.結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本待測(cè)指標(biāo)濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：