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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的 DHEA 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于腎上腺皮質功能、性激素前體合成、衰老及生殖內分泌研究等領域。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 DHEA 抗體。

結合：加入標準品或樣本，DHEA 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 DHEA 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

血清：無熱源無菌采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴禁反復凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細胞碎片與雜質，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。

2. 通用注意事項

1) 樣本嚴禁添加疊氮鈉（NaN?），會抑制 HRP 酶活性，導致顯色失效。

2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結合。

4) 細胞上清、低豐度指標樣本務必設置復孔，校正實驗誤差。

5) 檢測濃度超標時，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質體系。

操作步驟：

1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。

2.設置空白孔、標準品孔、待測樣品孔，精準加樣后封板。

3.37℃恒溫孵育結合反應，結束后棄孔內液體拍干。

4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復洗板 3–5 次，去除未結合雜質。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結合物，再次 37℃溫育。

6.重復洗板流程洗凈游離酶標抗體，保證背景干凈。

7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍色清晰顯現(xiàn)。

8.加入終止液終止反應，顏色由藍轉黃，即刻用酶標儀讀取 OD 值。

9.根據(jù)標準曲線擬合計算，得出樣本目標物質濃度。

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