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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠線粒體、細胞核、細胞及組織勻漿中的 AIF 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于 caspase 非依賴性凋亡、線粒體損傷、氧化應激及細胞死亡研究。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 AIF 抗體。

結合：加入標準品或樣本，AIF 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 AIF 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細胞上清：離心除雜質，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復孔檢測。

操作步驟：

1. 試劑回溫至 20–25℃，稀釋洗滌液、梯度配制標準品。

2. 每孔加 100μL 標準 / 樣本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。

3. 加 HRP 抗體，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。

4. 加 TMB 避光顯色 15min，加終止液混勻。

5. 450nm 快速測 OD 值，擬合曲線算濃度。

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