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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、炎性組織勻漿中的 CCL7 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于免疫細胞趨化、慢性炎癥、腫瘤浸潤及組織損傷修復研究。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 CCL7 抗體。

結合：加入標準品或樣本，CCL7 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 CCL7 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細胞上清：離心除雜質，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復孔檢測。

操作步驟：

1.加樣孵育

每孔精準加入 100μL 對應標準品 / 待測樣本，空白孔加等量；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結合。

2.洗板

輕柔棄去孔內液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復洗滌5 次，去除未結合雜質，降低背景值。

3.加酶結合物孵育

除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。

4.二次洗板

重復上述洗板操作 5 次，嚴格拍干孔內殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數據偏差。

5.底物顯色

避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準孵育 10~15min，此時液體逐步顯現藍色，顯色深淺與待測物含量正相關。

6.反應終止

嚴格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍色即刻轉為黃色，終止酶促顯色反應。

7.上機讀數檢測

加終止液后15min 內，用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線，擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。

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