本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的閉合蛋白 1（Cldn1）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞緊密連接、上皮屏障功能、皮膚黏膜通透性及組織穩(wěn)態(tài)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠水閘蛋白1(Cldn1)elisa試劑盒 | 英文名稱 | Cldn1 ELISA Kit |
貨號 | CS-5490E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 Cldn1 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Cldn1 被固相抗體捕獲。
檢測：加入化的抗大鼠 Cldn1 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1.試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。
標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
2.實(shí)驗(yàn)流程
加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，37℃孵育。
加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。
洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。
顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。
終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。
檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
3.關(guān)鍵提示
實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發(fā)。
洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。
顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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