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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠下丘腦、垂體、血清中的 CRH 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于 HPA 軸調(diào)控、應(yīng)激反應(yīng)、免疫 - 內(nèi)分泌交互及應(yīng)激相關(guān)疾病研究。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 CRH 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，CRH 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 CRH 抗體和 HRP 標(biāo)記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細(xì)胞上清：離心除雜質(zhì)，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲(chǔ)存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復(fù)孔檢測(cè)。

操作步驟：

1. 試劑準(zhǔn)備

將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。

標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2. 實(shí)驗(yàn)流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。

洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。

加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。

洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。

顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。

讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。

3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)

全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。

洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。

TMB 顯色液避光儲(chǔ)存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴(yán)禁接觸氧化劑。

加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。

公司正在出售的產(chǎn)品：