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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、淋巴細(xì)胞裂解液、組織勻漿中的 PFP 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞毒性免疫、NK 與 CTL 殺傷功能、抗病毒抗腫瘤免疫、移植排斥及自身免疫病研究。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 PFP 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，PFP 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 PFP 抗體和 HRP 標(biāo)記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細(xì)胞上清：離心除雜質(zhì)，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲(chǔ)存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復(fù)孔檢測(cè)。

操作步驟：

1.試劑準(zhǔn)備

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。

標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2.實(shí)驗(yàn)流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，37℃孵育。

加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。

洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。

顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。

終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。

檢測(cè)：在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。

3.關(guān)鍵提示

實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時(shí)使用封板膜避免蒸發(fā)。

洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。

顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。

公司正在出售的產(chǎn)品：