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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠基底膜、血清、組織勻漿中的 LN 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于基底膜完整性、細(xì)胞黏附遷移、組織纖維化、腎小球損傷及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移研究。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 LN 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，LN 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 LN 抗體和 HRP 標(biāo)記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本處理

1) 血清：無(wú)菌無(wú)熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。

2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。

3) 細(xì)胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 組織勻漿：預(yù)冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。

2. 通用注意

嚴(yán)禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標(biāo)樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實(shí)驗(yàn)建議設(shè)置復(fù)孔。

操作步驟：

1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說(shuō)明書(shū)稀釋配制。

2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣后封板。

3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng)，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。

4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復(fù)洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。

5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。

6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體，保證背景干凈。

7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。

8.加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。

9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：