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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 HSP-27 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞骨架保護(hù)、抗凋亡、氧化應(yīng)激、炎癥損傷及心血管病變研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 HSP-27 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，HSP-27 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 HSP-27 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。

?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。

?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。

2. 注意事項(xiàng)

樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。

操作步驟：

1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。

2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。

3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。

4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。

5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。

7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。

8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃；立即用酶標(biāo)儀在對(duì)應(yīng)波長測(cè)定 OD 值。

9.結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本待測(cè)指標(biāo)濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：