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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 MDA 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于脂質過氧化、氧化應激損傷、衰老、炎癥及缺血再灌注損傷評價研究。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 MDA 抗體。

結合：加入標準品或樣本，MDA 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 MDA 抗體和 HRP 標記親和素，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本處理

1) 血清：無菌無熱源采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復凍融。

2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。

3) 細胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 組織勻漿：預冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。

2. 通用注意

嚴禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實驗建議設置復孔。

操作步驟：

1.試劑準備

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。

標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。

2.實驗流程

加樣：設置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。

加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。

洗滌：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。

顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內呈現(xiàn)藍色。

終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉為黃色。

檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內完成讀數(shù)。

3.關鍵提示

實驗全程嚴格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發(fā)。

洗滌需充分，否則易造成高背景、結果偏差。

顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。

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