本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 pAMPK 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于能量代謝感知、脂糖代謝調(diào)節(jié)、細(xì)胞應(yīng)激及代謝性疾病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶elisa試劑盒 | 英文名稱 | pAMPK ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5664E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 pAMPK 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，pAMPK 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗大鼠 pAMPK 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。
3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃；立即用酶標(biāo)儀在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本待測(cè)指標(biāo)濃度。
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