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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專(zhuān)用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 sCD14 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于內(nèi)毒素信號(hào)應(yīng)答、先天免疫激活、膿毒癥及炎癥損傷研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 sCD14 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，sCD14 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗大鼠 sCD14 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類(lèi)型與處理

血清：無(wú)熱源無(wú)菌采血管采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。

2. 通用注意事項(xiàng)

1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉（NaN?），會(huì)抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。

2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。

4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實(shí)驗(yàn)誤差。

5) 檢測(cè)濃度超標(biāo)時(shí)，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋?zhuān)ヅ浠|(zhì)體系。

操作步驟：

1.試劑平衡試劑盒室溫平衡 30 min；濃縮洗滌液按說(shuō)明書(shū)稀釋混勻。

2.設(shè)孔加樣設(shè)空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣，封板。

3.溫育結(jié)合37℃孵育 30–60 min，棄液拍干。

4.洗板加滿洗滌液浸泡，甩干拍干，重復(fù)3–5 次。

5.加酶結(jié)合物除空白孔外每孔加 HRP 標(biāo)記液，封板 37℃孵育。

6.再次洗板充分洗凈未結(jié)合游離酶，控干殘留液體。

7.顯色避光加顯色液 A/B，避光 37℃顯色 10–15 min。

8.終止讀數(shù)加終止液變色穩(wěn)定后，立刻酶標(biāo)儀讀 OD 值。

9.結(jié)果計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，換算樣本濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：