本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專(zhuān)用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 CCL20 濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于樹(shù)突狀細(xì)胞趨化、黏膜免疫、皮膚炎癥及感染免疫研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3αelisa試劑盒 | 英文名稱(chēng) | MIP-3α/CCL20 ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-5745E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 CCL20 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，CCL20 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗大鼠 CCL20 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類(lèi)型與處理
血清：無(wú)熱源無(wú)菌采血管采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。
2. 通用注意事項(xiàng)
1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉（NaN?），會(huì)抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。
2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。
3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。
4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實(shí)驗(yàn)誤差。
5) 檢測(cè)濃度超標(biāo)時(shí)，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋?zhuān)ヅ浠|(zhì)體系。
操作步驟：
1. 試劑回溫至 20–25℃，稀釋洗滌液、梯度配制標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 每孔加 100μL 標(biāo)準(zhǔn) / 樣本，37℃孵育 90min，洗板 5 次。
3. 加 HRP 抗體，37℃孵育 60min，再次洗板 5 次。
4. 加 TMB 避光顯色 15min，加終止液混勻。
5. 450nm 快速測(cè) OD 值，擬合曲線(xiàn)算濃度。
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