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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的 CK18-M65 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于上皮細胞凋亡、肝細胞損傷、組織壞死及上皮源性病變評價研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗大鼠 CK18-M65 抗體。

結(jié)合：加入標準品或樣本，CK18-M65 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 CK18-M65 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 血清：避免溶血脂血，離心分離，-20℃分裝，禁反復凍融。

2. 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝，慎用肝素，離心取上清。

3. 細胞上清：離心除雜質(zhì)，-80℃保存。

4. 組織勻漿：冰上勻漿、高速離心取上清低溫儲存。

5. 禁忌：勿加疊氮鈉抑制 HRP；拒收污染溶血樣本，建議復孔檢測。

操作步驟：

1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。

2.加樣：設(shè)空白孔、標準品孔、樣品孔，每孔加對應(yīng)標準品 / 稀釋后樣本，封板溫育。

3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。

4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復洗板3–5 次。

5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標記抗體，封板 37℃再次溫育。

6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標物。

7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。

8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍變黃；立即用酶標儀在對應(yīng)波長測定 OD 值。

9.結(jié)果計算：以標準品濃度、OD 值繪制標準曲線，換算樣本待測指標濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：