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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)豬血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的骨特異性堿性磷酸酶 B（ALP-B）蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于成骨活性、骨代謝及骨骼發(fā)育研究等領(lǐng)域。

核心原理：

?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗豬 ALP-B 抗體。

?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，ALP-B 被固相抗體特異性捕獲。

?檢測(cè)?：加入標(biāo)記的抗豬 ALP-B 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

?血清?：使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。

?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。

?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。

2. 注意事項(xiàng)

樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。

操作步驟：

1. 試劑準(zhǔn)備

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），洗滌緩沖液按1:19稀釋。?

標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取6管標(biāo)準(zhǔn)品，按說(shuō)明書稀釋至0.156-10 ng/mL。

2. 實(shí)驗(yàn)流程

?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。

?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。

?洗滌?：

?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。

?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。?

?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD值），15分鐘內(nèi)完成。

關(guān)鍵提示

顯色底物避光保存，混合后應(yīng)為無(wú)色。

終止液加入順序需與顯色一致，充分混勻避免綠色殘留。

使用封板膜防止蒸發(fā)，確保孵育溫度穩(wěn)定。

公司正在出售的產(chǎn)品：