人原代氣管平滑肌原代細胞
細胞培養(yǎng)操作：
收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)
傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)
傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿
傳代方法：
1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。
商品屬性：
規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | 貨號 | EY-XY3271 |
種屬來源 | 人 | 組織來源 | 氣管 |
生長特性 | 貼壁生長 | 形態(tài)特征 | 成纖維細胞樣 |
形態(tài)：成纖維細胞樣
培養(yǎng)基：人氣管平滑肌細胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃
傳代特征：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)
細胞基本屬性：
種屬來源：人
組織來源：氣管氣管
生長特性：貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%胰蛋bai酶
產(chǎn)品貨期：7-8周左右
運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹：:人氣管平滑肌細胞采用胰蛋bai酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來，人氣管平滑肌細胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。氣管平滑肌細胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。平滑肌即無紋肌的通稱，平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨立的器官，而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素（肌層）。平滑肌細胞互相連接，形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官；在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運動和變形，也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮，使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān)．如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時，可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大，表型也發(fā)生改變，由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型，并分泌多種與細胞因子；而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。
原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：
?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。
?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。
五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。
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