實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為良好玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
水牛皮膚成纖維樣細胞；WB-S5 | 貼壁生長 | EY-X63898 |
?
細胞名稱 水牛皮膚成纖維樣細胞；WB-S5
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系來源于一雌性河川型水牛與沼澤型水牛雜交后代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2傳代；3-4天一次
傳代情況: P2
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
晶狀體蛋白αA檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；2B11形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Alpha-crystallin A chain
CHO細胞宿主蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；PP65形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣CHOHCP
鸚鵡衣原體抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人肝癌細胞株；Huh-7/F24形態(tài)特性: 上皮樣Chlamydia antibody
克氏錐蟲抗體檢測試劑盒細胞名稱: 一種產(chǎn)生抗羅非魚無乳鏈球菌的單克隆抗體的雜交瘤細胞株；4C12形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Trypanosomacruzi antibody
血管生成素樣蛋白1檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；FlounderIgM-H形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣angiopoietin-like protein 1
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白2檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；IE1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing protein 2, mitochondrial
角蛋白6B檢測試劑盒細胞名稱: 人白血病HL-60細胞耐藥細胞株；HL-60/RS形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Keratin6B
樁蛋白2檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；1E4形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Paxillin 2
血管生成素樣蛋白6檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；4E3形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣angiopoietin-like protein 6
Argonaut-1蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；11B10形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Argonaut1
NEL樣蛋白2檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；7G6形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣NEL Like Protein 2
Ⅲ型前膠原檢測試劑盒細胞名稱: 表達HP6H8抗體的中國倉鼠卵巢細胞株形態(tài)特性: 上皮樣ⅢPC
CA16-IgG檢測試劑盒細胞名稱: 新生牛支持細胞系；NBS形態(tài)特性: 上皮樣Coxsackievirus A16 IgG antibody
ED病檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；3G10形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣EDV
EB病1型檢測試劑盒細胞名稱: 人癌表柔比星耐藥細胞株；MDA-MB-231/EP1形態(tài)特性: 上皮樣EBV-1
EB病2型檢測試劑盒細胞名稱: 人膽管癌耐藥細胞株；RBE/5-FU形態(tài)特性: 上皮樣EBV-2
抗球蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞株；8D8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Anti-Glb
水牛皮膚成纖維樣細胞；WB-S5柴胡皂苷B258316-41-9中文別名：柴胡皂甙B2
英文名：Saikosaponin B2
CAS登錄號：58316-41-9
分子式：C42H68O3
分子量：780.99
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：白色晶體
規(guī)格：20 mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源：傘形科竹葉柴胡(Bupleurum marginatumWall. ex DC.)全草
溶解性：可溶于、、DMSO等溶劑，不溶于。
熔點：235-236℃
旋光度：-32.l°()
藥理藥效：本品具有散風退熱、疏肝解郁的作用,對感冒發(fā)熱有一定的防治效果。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
點擊放大
