公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號(hào) |
非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H1299 | 貼壁生長 | EY-X63583 |
細(xì)胞名稱 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H1299
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 這株細(xì)胞來源于一個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移?；颊呓邮芰顺跗诜暖?。細(xì)胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達(dá)。細(xì)胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)良好胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: P(47+5)
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為良好玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Homo sapiens, human mammary gland; b癌細(xì)胞HBCC/HL-004 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Comamonas denitrificans Gumaelius et al.細(xì)胞名稱: 小鼠正常胃上皮細(xì)胞；MNSEC/HL-005 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Lophotrichus ampullus Benjamin細(xì)胞名稱: 小鼠正常皮膚角質(zhì)細(xì)胞；MNSK/HL-006 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
freeze-dried細(xì)胞名稱: 放射抗拒性Lewis肺癌細(xì)胞株；R-LLC MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 猴胚胎腎上皮細(xì)胞Marc-145懸浮適應(yīng)株； MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Wolinella succinogenes (Wolin et al.) Tanne ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；1D7C11 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mycobacterium bovis Karlson and Lessel細(xì)類結(jié)腸癌細(xì)胞系；DXH-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Mus musculus, mouse細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；11F11E4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Streptomyces purpureus (Matsumae and Hata) ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；A12D3 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 小鼠正常氣管上皮細(xì)胞；MNTEC/HL-007 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；FF/7A8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Cercospora zeae-maydis Tehon et Daniels, an ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；TAP/5F4 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株；C12D1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Enterobacter cloacae (Jordan) Hormaeche 正常角膜上皮細(xì)胞；HNCEC/HL-008 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Agaricus vaporarius (P正常眼瞼上皮細(xì)胞；HNEEC/HL-014 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
正常上皮細(xì)胞；HNVEC/HL-016 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H1299人靶向核糖核酶(TR)ELISA試劑盒TIMP-3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人類粘蛋白(ORM)ELISA試劑盒TIMP-3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒TIMP-4ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)ELISA試劑盒TIMP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒TIMP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人腫瘤標(biāo)志物(CA724)ELISA試劑盒TLaELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人黑色素細(xì)胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒TLR4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人普通急性淋巴細(xì)胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒TLR-9ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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