本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測豬血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 Ⅲ 型膠原（Col Ⅲ）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于結(jié)締組織結(jié)構(gòu)、組織纖維化及損傷修復(fù)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa試劑盒 | 英文名稱 | Col Ⅲ ELISA Kit |
貨號 | CS-0499E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗豬 Col Ⅲ 抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Col Ⅲ 被固相抗體特異性捕獲。
?檢測?：加入標(biāo)記的抗豬 Col Ⅲ 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），洗滌緩沖液按1:19稀釋。?
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：取6管標(biāo)準(zhǔn)品，按說明書稀釋至0.156-10 ng/mL。
2. 實驗流程
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。?
?檢測?：450nm波長測定吸光度（OD值），15分鐘內(nèi)完成。
關(guān)鍵提示
顯色底物避光保存，混合后應(yīng)為無色。
終止液加入順序需與顯色一致，充分混勻避免綠色殘留。
使用封板膜防止蒸發(fā)，確保孵育溫度穩(wěn)定。
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