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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的百日咳病毒抗體（IgG）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于病原感染、免疫監(jiān)測及疫苗效果研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠百日咳病毒抗原對應(yīng)抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，百日咳病毒抗體（IgG）被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗小鼠百日咳病毒抗體（IgG）和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本處理

1) 血清：無菌無熱源采血管采集，避免溶血 / 脂血；1000×g 離心 10 min 取上清，-20℃分裝，禁反復(fù)凍融。

2) 血漿：EDTA / 檸檬酸鹽抗凝（慎用肝素），離心分離上清。

3) 細(xì)胞上清：1000×g 離心除碎片，-70~-80℃保存。

4) 組織勻漿：預(yù)冷 PBS / 生理鹽水冰上勻漿，高速離心取清亮上清低溫保存。

2. 通用注意

嚴(yán)禁加NaN3抑制 HRP 活性；杜絕溶血、渾濁、污染樣本；全程低溫防降解；超標(biāo)樣本用試劑盒專用稀釋液稀釋，實(shí)驗(yàn)建議設(shè)置復(fù)孔。

操作步驟：

1. 試劑準(zhǔn)備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
2. 實(shí)驗(yàn)流程加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，37℃孵育。加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。

公司正在出售的產(chǎn)品：