本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的磷酸化蛋白激酶C（P-PKC）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞信號傳導(dǎo)、代謝調(diào)控及免疫功能調(diào)節(jié)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)elisa試劑盒 | 英文名稱 | P-PKC ELISA Kit |
貨號 | CS-0905E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠P-PKC抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，P-PKC被固相抗體特異性捕獲。
檢測：加入標(biāo)記的抗小鼠P-PKC抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。
3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。
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