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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的可溶性CD30配體（sCD30L）濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達0.16 ng/mL，適用于免疫細胞活化、炎癥反應及淋巴增殖相關研究等領域。

核心原理：

固相化：微孔板預先包被抗小鼠sCD30L抗體。

結合：加入標準品或樣本，sCD30L被固相抗體特異性捕獲。

檢測：加入標記的抗小鼠sCD30L抗體和HRP標記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。

顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

?血清?：使用無熱原/內毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。

?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。

?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。

?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。

2. 注意事項

樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動，建議設復孔。

操作步驟：

1. 試劑準備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標準品按說明書進行梯度稀釋，配制系列濃度標準曲線溶液。
2. 實驗流程加樣：設置空白孔、標準孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標準品或待測樣品，37℃孵育。加酶標抗體：除空白孔外，每孔加入酶標抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內呈現(xiàn)藍色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍色轉為黃色。檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內完成讀數(shù)。

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