氣單胞菌PCR檢測試劑盒使用方法
氣單胞菌PCR檢測試劑盒使用方法
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
按照試劑盒操作說明或者微生物樣品處理方法做好樣品前處理。
1.2 DNA 提取
根據(jù)您實驗室的具體情況和樣品類型，選擇適當(dāng)?shù)奶崛〔呗苑椒?。為了使實驗結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠，我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取，嚴(yán)格按照對應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行操作，樣本核酸提取過程中應(yīng)避免污染，提取好的模板樣品如不能立即檢測，建議-15℃以下保存。
推薦采用我們公司研發(fā)生產(chǎn)的試劑盒：Hypure 病毒基因組 DNA 提取試劑盒
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
2.1 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫（20～25℃），注意避免強(qiáng)光照射，待溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s，使用低吸附吸頭分液取樣，避免試劑損失和浪費。
2.2 根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑
煙曲霉反應(yīng)液
煙曲霉擴(kuò)增液
用量（樣本數(shù)為N）
19.5μL
0.5μL
2.3 在適當(dāng)容積的無菌離心管中加入上述試劑，充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s，按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯(lián) PCR 反應(yīng)管中。
2.4 蓋緊八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋, 并注意做好相應(yīng)標(biāo)識（請標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋兩端突出部位，切勿標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋中間，以免影響信號采集）。將 PCR 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)，剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存。
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1.2 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心，核酸加樣過程中應(yīng)避免污染。
